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乙型肝炎患者抗HBc_IgM与炎症活动、病毒载量的关系分析

首席医学网      2010年05月05日 09:50:33 Wednesday  
 
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作者:马美红 邱林清 贺勇锋    作者单位:惠东县人民医院,广东 惠东 516300

【摘要】  目的:通过对乙型肝炎血清标志物(HBV-M)的定性检测中HBsAg阳性常见模式的患者血清标本进行HBcAb_IgM检测, 探讨HBcAb_IgM检测的临床意义。方法:取117例HBsAg阳性的常见模式的乙型肝炎患者血清标本进行HBcAb_IgM检测, 之后对HBcAb_IgM阳性患者血清标本进行HBV DNA定量检测。 结果:经HBcAb_IgM检测25例HBsAg、HBeAb、HbcAb为阳性而ALT正常的标本,其血清HBcAb_IgM 1例阳性 (阳性率4%),18例HBsAg、HBeAb、HBcAb为阳性而ALT异常的标本,其HBcAb_IgM 7例阳性(阳性率38.9%),15例HBsAg、HbcAb为阳性而ALT正常的标本,其血清HBcAb_IgM 2例(阳性率13.3%),10例HBsAg, HBcAb阳性而ALT异常的标本,其血清HBcAb_IgM 8例阳性(阳性率80%),25例HBsAg、HBeAg、HBaAb阳性而ALT正常的标本,其血清HBcAb_IgM 0例阳性,24例HBsAg、HBeAg、HBaAb阳性而ALT异常的标本,其血清HBcAb_IgM 2例(阳性率8.3%),在 HBcAb_IgM阳性结果中HBV DNA阳性率为95%。 结论:乙型肝炎患者血清中HBcAb_IgM的产生与肝功能损害可能存在一定关系,可以作为乙肝病毒复制的指标之一 ,并有助于对于乙型肝炎患者是否需要进行治疗的判断。

【关键词】  乙型肝炎;乙型肝炎核心抗体

(抗HBc_IgM);ALT;HBV DNA 乙肝病毒侵入机体后,其抗原刺激免疫系统产生免疫应答,血中出现相应抗体,其中HBcAb_IgM出现较早。HBcAb_IgM在急性感染、慢性活动性乙型肝炎等方面具有重要的作用[1]。本文主要探讨在HBV-M的定性检测中常见模式HBsAg、HBeAb、HBcAb为阳性、HBsAg、HbcAb为阳性和HBsAg、HBeAg、HbcAb为阳性的乙肝患者血清标本进行HBcAb_IgM检测的临床意义。

  1.材料与方法

  1.1 标本来源:2008年11月至12月期间住院和门诊患者117例,其中男 71例,女46例,年龄18-40岁,平均(30.5士12.0)岁,ALT值在10-500U/L之间,总胆红素(TBIL)小于50μmol/L。诊断符合2000年西安第十届全国病毒性肝炎肝病学术会议诊断标准,病原学HBsAg(+),其他肝炎病毒(甲、丙、丁、戊)指标均为阴性,并排除酒精性及药物性肝损害。

  1.2 试剂:乙型肝炎病毒核心抗体(IgM)诊断试剂盒。

  1.3 仪器:酶标仪。

  1.4 ELISA ELISA检测抗HBc_IgM采用捕获法, 按试剂说明书操作,如下:

  1.4.1 加样:标本用生理盐水作1:1000稀释后,用移液器吸取100微升,加入反应板内,并设抗HBc_IgM阴性对照2孔,每孔100微升;HBcAb_IgM阳性对照2孔,每孔100微升,空白对照孔;用封片封盖反应板。置37℃孵育30分钟。

  1.4.2 洗涤:弃去孔内液体。用洗涤液注满每孔,静置30秒,甩干,反复5次,扣干。

  1.4.3 同时加HBcAg和酶结合物各50微升,空白对照孔不加,充分混匀后用封片封盖反应板,置37℃孵育30分钟。

  1.4.4 重复1.4.2洗涤过程。

  1.4.5 显色:每孔加显色剂A、B剂各50微升,混匀,置37℃孵育10分钟。

  1.4.6 加终止液:每孔加终止液50微升。

  1.4.7 判断结果:酶标仪读数法(波长450nm):用空白孔校零点,然后读取各孔0D值。样品OD值/阴性对照平均OD值≥4.0判断为阳性,否则为阴性。

  1.5 荧光定量PCR 荧光定量PCR法对HBV DNA 进行定量,按试剂和仪器说明书操作。当检测值≥1.00×103 copies/ml时,HBV DNA为阳性。

  2.结果

  117例HBsAg阳性的常见模式的血清标本进行HBcAb_IgM检测结果(见表1)。表1 117例乙肝患者的HBcAb_IgM检测结果从表1可知:ALT正常与异常的HBcAb_IgM阳性率差别有统计学意义(P<0.05)即是HBcAb_IgM与ALT水平存在一定的相关性;HBcAb_IgM阳性结果中HBV DNA的阳性与阴性差别有显著统计学意义(P<0.01)即是HBcAb_IgM与血清HBV DNA 定量有密切的相关性。

  3.讨论

  乙型病毒性肝炎,简称乙肝,是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的传染性疾病,严重危害健康,影响生活质量。HBV感染呈全球性分布,中国是高流行区之一。因此有必要对乙型肝炎患者血清中的各种标志物以及它们之间的相互关系有个充分的了解和认识,这样才能有助于临床分析和诊断,以达到能够对症冶疗和提高疗效的作用,这样才可以避免误诊给患者造成不必要的心理负担和经济负担及医药资源的浪费。乙肝病毒侵入机体后,其抗原刺激免疫系统产生免疫应答,血中出现相应抗体,其中HBcAb_IgM出现较早, 它被认为是乙肝病毒急性感染的敏感指标,还可见于慢性活动性乙型肝炎。ALT主要存在于肝细胞浆中,对肝损害极为敏感,在肝实质细胞大量损伤时,肝细胞膜通透性增加,ALT可显著升高,其水平可反映肝损伤程度。从表1可以知道ALT正常的HBcAb_IgM阳性率为4.7%,而ALT异常的HBcAb_IgM阳性率为32.7%,进行卡方检验统计学分析可知: ALT正常与异常的HBcAb_IgM阳性率差别有统计意义(P<0.05)即是当ATL异常时HBcAb_IgM阳性率有显著升高;乙型肝炎的患者如急性病毒性肝炎和慢性活动型肝炎在病情得到缓解以后,ALT将随着下降,而HBcAb_IgM可消失 ,为HBcAb_IgG所取代,所以才会出现ATL正常而HBcAb_IgM阳性率显著降低。而在HBsAg、HBeAb、HBcAb为阳性而ALT正常和HBsAg、HBcAb为阳性而ALT正常的组别中有少数患者有HBcAb_IgM出现,可能与这些患者由病变活动转为静息时间不长有关。席向红等[2]认为,在肝细胞炎症基本清除,血清 ALT, AST恢复正常以后,HBcAb_IgM仍可维持较高滴度,并持续存在一段时间,这提示: 乙型肝炎患者血清中HBcAb_IgM的产生与肝功能损害有一定关系,与何风琼等[3]观点一致。因此乙型肝炎患者进行ALT与HBcAb_IgM联合检测对了解肝脏损害情况具有一定指导意义,特别是HBeAg阴性的患者。据许多文献报道,HBsAg、HBeAg、HBcAb为阳性的乙型肝炎患者血清中HBcAb_IgM阳性率应高于HBsAg、HBeAb、HBcAb为阳性和HBsAg、HBcAb为阳性的乙型肝炎患者,但从表1中可知却出现了相反的结果。造成这个结果可能的原因:当患者产生乙肝急性感染时HBeAg持续存在时间不长,一般不超过10周,而持续存在超过10周则提示感染转为慢性化[4]。因此可推断在实验中HBeAg阳性的乙型肝炎患者多以迁延性慢性肝炎主,血清中主要为HBcAb_IgG为主,而HBcAb_IgM大多为低滴度,同时在实验过程中,被测血清进行了1000倍稀释后,HBcAb_IgM的滴度已达不到常规试剂盒的灵敏度而造成难以检测到HBcAb_IgM[5]。而HBsAg,HBeAg,HBaAb阳性而ALT异常的组别中出现了少数HBcAb_IgM阳性的患者,可能这些患者正处于急性感染期,因为当患者产生了乙肝急性感染时,绝大多数都伴随有ALT异常,而ALT正常的患者大多为慢性肝炎,从HBsAg,HBeAg,HBaAb阳性而ALT正常组别中未出现一例抗HBc_IgM阳性说明这一点。HBV DNA可作为病毒的复制及有传染性的指标。从表1可知HBcAb_IgM阳性结果中HBV DNA的阳性与阴性差别有显著统计学意义(P<0.05)即是HBcAb_IgM与血清HBV DNA 定量有密切的关系。尽管许多文献报道,HBeAg阴性的乙肝患者(即是HBV-M的定性检测中HBsAg、HBeAb、HBcAb为阳性或HBsAg、HBcAb为阳性的乙肝患者)为乙肝病毒复制相对静止,但通过HBcAb_IgM的检测从表1可知HBcAb_IgM阳性的相当一部分为HBeAg阴性乙肝患者,因此表明HBcAb_IgM阳性的HBeAg阴性乙肝患者并没有停止乙肝病毒复制,仍然有极强的传染性。从方法学角度看,采用PCR技术检测HBV DNA是理论上乙肝病毒复制是否存在的“金标准”,但其对实验要求如实验室布局、人员技术、特殊仪器要求较高,临床应用并不理想。2000年全国HBV DNA PCR室间质评结果显示,在所有91家实验室中,仅有28家(30.8%)测定结果全部正确[6],而HBcAb_IgM对实验要求并不高,因此它适合基层医院诊断在乙型肝炎特别是HBeAg阴性的乙肝患者中是否存在乙肝病毒复制的指标之一。但是对于临床有高度怀疑存在乙肝病毒复制而HBcAb_IgM阴性的乙型肝炎患者仍需进行用HBV DNA检测进行确认。据相关文献报道和临床医生反映,非常多中青年的肝癌、肝硬化患者,他们的HBVM都是HBsAg、HbcAb为阳性,但至今还未有充足证据证实它产生这样结果的原因。由于以前我们认为HBVM的结果HBsAg,HbcAb为阳性就是携带者,从而忽视它,不进行必要的相关检验和治疗,所以我们现在有必要改变这个错误观点,但不是所有的HBsAg,HbcAb为阳性的患者需要进行,因此我们需要找到一个好的检验项目来指导治疗。从表1中可知,HBsAg、HBcAb为阳性而ALT异常的组别中HBcAb_IgM阳性率达到80%,而HBcAb_IgM与乙型肝炎的患者肝脏炎症活动存在相关性,从中可推测HBcAb_IgM与HBsAg、HbcAb为阳性乙型肝炎的患者容易产生肝硬化、肝癌存在密切相关性,或许HBcAb_IgM可以作为HBsAg,HbcAb为阳性的患者需要进行治疗的检验项目。当然HBcAb_IgM是否可以作为HBsAg,HbcAb为阳性的患者需要进行治疗的检验项目,还是需要进行大量的实验和对HBsAg,HBcAb、HBcAb_IgM为阳性而ALT异常的患者进行长期随访验证。

【参考文献】
   [1] Rodella A,Galli C,Terlenghi L, et al .Quantitative analysis of HbsAg,IgM anti-HBc and anti-HBc avidity in acute and chronic hepatitis B.J Clin Virol,2006,37:206-212.

  [2] 席向红,刘祥红,贾韶彤,等. 抗-HBc_IgM与生化指标ALT关系的探讨.宁夏医学院学报,2001, 23:47-49.

  [3] 何风琼,粱军,简政. 乙型肝炎患者血中抗HBc_IgM检测的临床意义. 现代医药卫生, 2006, 22(10):1494-1495.

  [4] 洪秀华,等.临床微生物学检验[M]. 第一版.中国医药科技出版社,2004,473-474.

  [5] 夏邦世,沈忠海,等. 低滴度抗一HBc IgM测定在慢性乙型肝炎病变判断中的价值. 中华传染病杂志,2006,24(3):204-205.

  [6] 李金明,王露楠,邓巍,等.乙型肝炎病毒DNA聚合酶链反应测定的全国室间质量评价[J].中华医学杂志,2000,80(2):116-117.

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