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AS-PCR技术检测20个mtDNA SNP位点及单倍型频率

首席医学网      2015年03月26日 16:04:04 Thursday  
 
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作者:聂燕钗,张晨,刘亚楠,黄江平,焦海涛,吴丹

【摘要】  基于等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)技术,建立一种三色荧光标记复合扩增检测线粒体DNA(mtDNA) SNP的方法。方法基于AS-PCR原理,选择20个mtDNA编码区SNP位点,分为两组,分别标记FAM和HEX荧光,每个位点设计具有长度差异的两条上游(下游)等位基因特异性引物以及一条下游(上游)通用引物。结合AS-PCR技术和毛细管电泳,检测200份无关个体血样。各位点随机选取至少3个样本进行直接测序验证,并进行单倍型频率调查。结果200份血样均得到清晰分型,各位点的检测结果与直接测序结果完全一致。10μL体系下,DNA最低检测浓度为0.2 pg,当模板量为0.5~5 pg时能得到较为理想的分型图谱。在200名无关个体中,共分出15种单倍型,单倍型多样性为0.9060。结论 AS-PCR技术是一种简单、快速且有效的mtDNA SNP分型方法,适用于法庭科学检验的需求。

【关键词】  法医遗传学 知识脉络 多态性,单核苷酸 知识脉络 等位基因 知识脉络 聚合酶链反应 知识脉络 单倍型

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