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HPLC法测定头孢唑啉钠含量的不确定度分析

首席医学网      2010年12月29日 11:53:09 Wednesday  
 
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作者:闻 俊    作者单位:(开封市食品药品检验所 开封475000)

【摘要】  目的:建立以HPLC法测定头孢唑啉钠含量的不确定度方法。方法:建立数学模型,对含量测定过程中的各影响因素进行分析评定。 结果:通过计算各分量的不确定度,合成不确定度,最终得出扩展不确定度。结论:该评定方法适用于HPLC法测定头孢唑啉钠含量的不确定度。

【关键词】  HPLC; 头孢唑啉钠; 不确定度

 测量不确定度就是对测量结果质量可信度的定量表征,对测量、试验结果的可信性、可比性和可接受性都有非常重要的意义[2]。药品检验是药品监督执法、药品贸易、患者维权等工作的技术依托。检验结果的质量直接影响上述工作的公正性和科学性,因此就需要通过度量结果的可信度来证明结果的适宜性。本法用HPLC法测定头孢唑啉钠含量的不确定度进行评定,并进行整体合成,最终给出检测结果的置信区间和置信水平。

  1 仪器与试药

  高效液相色谱仪:岛津LC2010,配紫外检测器;分析天平:Precisa 92SM202A型;头孢唑啉对照品:由中国药品生物制品检定所提供,批号04219603,含量99.3%;供试品(头孢唑啉钠):由某厂提供;乙腈为色谱纯,其他试剂为分析纯,水为纯净水;玻璃器皿均为A级。

  2 方法[1]

  2.1 色谱条件 色谱柱

  Agela C18(5μm,250mm×4.6mm);流动相:磷酸氢二钠、枸橼酸溶液(取无水磷酸氢二钠1.33g与枸椽酸1.12g,加水溶解并稀释成1000ml) 乙腈( 87 :13);检测波长:254nm;柱温:35℃;流速:1.0ml/min;进样量:10μl。

  2.2 对照品溶液的制备

  取头孢唑啉对照品约20mg,精密称定,置200ml量瓶中,加磷酸盐缓冲液(pH 7.0)(取磷酸二氢钾0.68g,加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1ml,用水稀释至100ml,即得。)5ml溶解后,用流动相稀释至刻度,摇匀,即得。

  2.3 供试品溶液的制备

  精密称取本品适量,置200ml量瓶中,加流动相适量,振摇使头孢唑啉钠溶解,再加流动相稀释至刻度,摇匀,即得。

  2.4 测定

  上述两种溶液滤过,取续滤液进样,按外标法以峰面积计算供试品中头孢唑啉的含量。

  3 外标一点法含量测定的不确定度分析

  3.1 数学模型

  X=Ct×VtWt×100% (1)Ct=AtAs×Cs (2)Cs=Ws×PsVs (3)X:供试品含量(%);Ct:供试品溶液的浓度(mg/ml); Cs: 对照品溶液的浓度(mg/ml);Wt:供试品取样量(mg);As:对照品峰面积;At:供试品峰面积;Ws:对照品取样量(mg);PS:对照品纯度;Vs:对照品溶液的稀释体积数(ml);Vt:供试品溶液稀释体积数(ml)。

  3.2 不确定度分量来源的分析

  HPLC法测定头孢唑啉钠原料含量的不确定度来源主要是对照品和供试品两个方面。对照品引入的不确定度主要包括称量、稀释和其溶液色谱峰面积三个方面,供试品引入的同样是此三个方面。

  3.3 各分量不确定度的评定与分析

  3.3.1 对照品的不确定度u(Ws)

  ① 对照品称量引入的不确定度u(Ws)UsM的来源由对照品的纯度和天平称量构成。头孢唑啉对照品纯度为99.3%未提供不确定度,假定为0,引入的不确定度uprel为0。根据Precisa92SM202A电子天平说明书,分辨力为0.01mg,按矩形分布,包含因子k=3,则天平的称量不确定度为u(W1)=0.01×10-3/ 3=5.8×10-6g,说明书给出的重复性误差为0.02mg,按矩形分布,包含因子k=3,则天平的重复性不确定度为u(W2) =0.02×10-3/ 3=1.15×10-5g,天平的标准不确定度u(W)= (u2(W1)+u2(W2))1/2=1.29×10-5。对照品称样2份,分别为0.02149g,0.02021g,则对照品称样的相对不确定度umrel=﹛﹝u(W)/0.02149﹞2+﹝u(W)/0.02021﹞2﹜1/2=8.76×10-4。u(Ws)=( u2prel+ u2mrel)1/2=8.76×10-4。

  ② 对照品稀释引入的不确定度u(Vs)对照品稀释过程中玻璃容器引入的相对标准不确定度uVs:对照品溶液的配制过程中,用(200±0.15)mlA级量瓶[3]定容,按矩形分布,包含因子k=3,则200ml量瓶的相对标准不确定度为u(Vs)=0.15/3 /200=0.00043。

  环境温度引入的相对标准不确定度u(Ts):在空调条件下,设室温为(20±5)℃。溶剂水的体积膨胀系数为2.1×10-4℃-1,按照矩形分布,包含因子k=3,则环境温度引入的不确定度为:u(Ts)=5×2.1×10-4×VS/3/ VS=0.00061。对照品稀释过程的相对标准不确定度为:urel(Vs)=(u2(Vs)+ u2(Ts))1/2=7.46×10-4。

  ③ 对照品溶液色谱峰面积引入的不确定度u(As)由于外标一点法假设曲线过零点,线性为1,顾不考虑曲线校正引入的不确定度,只考虑进样重复性的不确定度。实验中两份对照品溶液分别进样5次和3次,取对照品溶液s1(n=5)进样结果计算不确定度,峰面积分别为1564668、1564398、1564110、1564693、 1564193,RSD(%)为0.02%,相对标准不确定度为u(As)= RSD/51/2=0.0089。对照品的不确定度u(s)=(u2(Ms)+u2(Vs)+u2(As))1/2=0.0090

  3.3.2 供试品的不确定度u(t)

  ① 供试品称量引入的不确定度u(Wt)u(Wt)的来源由供试品的称量引入的。得出天平的标准不确定度u(W)= 1.29×10-5,供试品称样2份,分别为0.02078g,0.02001g,则供试品称样的相对标准不确定度u(Wt) =﹛﹝u(W)/0.02078﹞2+﹝u(W)/0.02001﹞2﹜1/2=6.45×10-4。

  ② 供试品稀释引入的不确定度u(Vt)供试品稀释过程同对照品,并在相同条件下进行,因此玻璃容器引入的相对标准不确定度urel(Vt) =0.00043, 环境温度引入的不确定度为:urel(Tt)=0.00061。供试品稀释过程的相对标准不确定度为:u(Vt)=7.46×10-4。

  ③ 供试品溶液色谱峰面积引入的不确定度u(At)实验中两份供试品溶液分别进样3次,取供试品溶液t1(n=3)进样结果计算不确定度,峰面积分别为1400336、1400224、1400248,RSD(%)为0.02%,相对标准不确定度为urel (At)= RSD/31/2=0.0023。供试品的不确定度ut=(u2(Wt)+u2(Vt)+u2(At))1/2=0.0025。

  3.3.3 量测定的合成相对不确定度u(x)

  u(x)由对照品引入的不确定度u(s)和供试品引入的不确定度u(t)构成,u(x)=(u2(s)+u2(t))1/2=0.0093,由公式计算出头孢唑啉的百分含量为91.94%,合成标准不确定度uc(x)=0.0093×91.94%=0.86%。

  3.3.4 含量测定的扩展不确定度U

  取包含因子K=2(置信区间约为95%),则含量测定扩展不确定度U95=K×uc(x)=2×0.86%=1.72%,头孢唑啉钠的含量测定结果可表示为91.94%±1.72%(K=2)。

  4 小结

  分析评估不确定度时,首先应尽量考虑不确定度的所有来源,因为最终合成不确定度的结果完全取决于各分量值。考虑到本法的测定结果的不确定度主要来源于天平、高效液相色谱仪进样的重复性和玻璃容器的允差,因此设计本次实验方案时,使用了尽量少的玻璃量器,并在称量过程中尽量少的引入不确定因素,进样份数增加,因此得到最终扩展不确定度仅为1.72%。

【参考文献】
   1 中国药典.2005年版.二部.

  2 测量不确定度评定与表示.JJF 1059,1999 国家质量技术监督局.

  3 常用玻璃量器检定规程. JJG 1962006 国家质量技术监督局.

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