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腭裂相关基因甲状腺转录因子-2转基因小鼠的生物学特征

首席医学网      2014年10月07日 13:03:16 Tuesday  
 
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作者:黄磊; 石冰; 郑谦; 蒙田    作者单位:广州市第一人民医院口腔科; 口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院(四川大学); 口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院(四川大学)唇腭裂外科

【摘要】  目的建立腭裂相关基因甲状腺转录因子-2(TTF-2)转基因小鼠模型,利用转基因动物模型研究TTF-2基因的活动规律和表达模式发生变化时对腭突发育过程产生的影响。方法采用聚合酶链反应法扩增C57BL/6J小鼠基因组TTF-2基因,将其定向插入pBROAD3-mcs载体,构建重组表达质粒pBROAD3-TTF-2,利用显微注射技术把线性化表达载体注射到受精卵的雄原核中,建立TTF-2转基因小鼠。利用特异引物聚合酶链反应和Southern blot方法鉴定转基因小鼠的基因型,采用免疫组织化学法检测TTF-2基因在转基因小鼠腭突组织中的表达。结果共注射原核期受精卵982枚,发育为2-细胞胚胎的580枚,均移植入48个假孕受体昆明白小鼠中,得到胎鼠68只。提取基因组DNA,发现有13只转基因阳性的胎鼠。免疫组织化学法检测显示TTF-2在转基因小鼠腭突中持续表达。结论通过显微注射法使外源基因pBROAD3-TTF-2整合入小鼠基因组中,成功建立了腭突持续表达TTF-2的转基因小鼠模型,其表现型为腭裂。

【关键词】  甲状腺转录因子-2; 持续表达; 转基因小鼠; 腭裂

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