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附子与瓜蒌配伍对大鼠心、肝、肾脏的毒性作用

首席医学网      2012年07月22日 14:12:04 Sunday  
 
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作者:马瑜红 李 玲 阮 耀 张海燕 欧阳静萍1     作者单位:1 武汉大学医学院基础医学部 (南阳医学高等专科学校基础医学部,河南 南阳 473000)

【摘要】  目的 研究附子配伍瓜蒌对大鼠心、肝、肾功能和形态学的影响。方法 取健康SD大鼠40只随机分为正常组、附子组、瓜蒌组、附子+瓜蒌组,每组10只。各组每日分别按2.5 g/kg灌胃给予生理盐水、附子煎液、瓜蒌煎液、附子与瓜蒌混合煎液,给药组浓度均为200 g/L。第14天停药,称重,采集心脏、肝脏及肾脏标本,计算体重增长率及心、肝、肾脏指数并观察其形态学改变;心脏取血,测定各组血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酰氨基转移酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量。结果 体重增长率、脏器指数各组间均无显著差异(P>0.05);心肌、肝脏形态学改变各给药组均可见不同程度的损伤;对肾脏形态学改变附子组明显,瓜萎及附子+瓜萎组不明显;生化检测指标与正常组相比,附子组LDH、BUN、Cr明显升高(P<0.05,P<0.01);附子+瓜萎组LDH、CK较瓜萎组明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论 给药剂量为2.5 g/kg时,单用附子对大鼠有显著的心脏、肝脏和肾脏毒性,瓜蒌对大鼠肝脏的损伤明显,对心脏、肾脏具有一定的毒性;附子与瓜蒌合用心脏毒性可能略有提高,对肝脏的毒性不能下定论,对肾脏毒性不明显。

【关键词】  附子;瓜蒌;中药;十八反;毒理学

  “十八反”是中医界沿袭数千年的用药禁忌,是中药药性理论的重要组成部分,为历代医家所推崇,中华人民共和国药典和各类教科书均采纳其内容。但也有古今众多医家对“十八反”观点不一,“十八反”作为配伍禁忌的合理性也是现代药性理论研究争议的焦点问题。关于“半蒌贝蔹及攻乌”的研究多有报道〔1~4〕。附子为毛莨科植物乌头的子根加工品,朱林平〔5〕认为附子与乌头同出一源,故其也不宜与此5味药物配伍。因附子在临床应用较乌头更为广泛,本实验选择附子与瓜蒌这一药对,通过观察其单用及配伍应用后对大鼠体重增长率、脏器指数及形态学改变的影响及对心肌酶谱、肝功能、肾功能部分生化指标的检测,从而对附子与瓜蒌配伍是否具有毒性及毒性作用的靶器官进行探讨,为临床合理用药提供实验依据。

  1 材料与方法

  1.1 动物

  SPF级健康雄性SD大鼠,体重180~200 g,购自华中科技大学同济医学院实验动物学部,合格证号scxk(鄂)2004-0007。

  1.2 仪器及设备

  BM-Ⅷ生物组织包埋机、冷冻台(孝感市宏业医用仪器有限公司);DMR+Q550型病理图像分析仪(德国Leica公司);Olympus万能显微镜;日立7179全自动生化仪。

  1.3 药物

  白附片、瓜蒌,购自河南省宛西制药股份有限公司仲景大药房,由南阳医学高等专科学校生药学袁国卿副教授鉴定。附子单煎40 min,瓜蒌单煎20 min,附子与瓜蒌配伍用药时先将白附片煎20 min后加入瓜蒌合煎20 min。药物浓度均为200 g/L,晾凉后置于冰箱冷藏室中备用。

  1.4 试剂

  乳酸脱氢酶(LDH,批号:071121)、肌酸激酶(CK,批号:080391)、丙氨酰氨基转移酶(ALT,批号:080375)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST,批号:080381)、血清尿素氮(BUN,批号:071275)及肌酐(Cr,批号:080375),均为中生北控生物科技股份有限公司生产。

  1.5 方法

  取SD大鼠40只,随机分为正常组、附子组、瓜蒌组、附子+瓜蒌组,每组10只,称重,标记。各组每日分别用灌胃法给予2.5 g/kg生理盐水、附子煎液、瓜蒌煎液及附子与瓜蒌混合煎液,各给药组浓度均为200 g/L。于4、8、12 d各称重一次并调整给药剂量。第14天停药,禁食不禁水12 h后,称重,用100 g/L的水合氯醛麻醉后,解剖、暴露出心脏,自左心室取血5 ml制备血清,测定各组血清LDH、CK、AST、ALT、BUN、Cr含量;分离心脏、肝脏及肾脏,用生理盐水冲洗后称重,用中性缓冲甲醛溶液固定,通过脱水透明、浸蜡包埋、切片与贴片、脱蜡HE染色、脱水透明、封固,光镜下观察形态学改变。

  1.6 统计方法

  实验数据采用SPSS13.0统计软件分析处理,结果以x±s表示,组间比较采用F检验进行整体方差分析,方差齐者用q检验,方差不齐者用秩和检验。

  2 结 果

  2.1 体重及脏器指数

  从表1可见,各组体重增长率、心、肝、肾脏指数均无显著差异(P>0.05)。表1 各组体质量增长率、心、肝、肾脏指数

  2.2 心肌形态学

  正常组结构正常;附子组心肌间隙明显宽大,肌束细长,肌纤维粗细不等,少许区域肌浆有融合现象,间质中可见个别炎细胞浸润;瓜萎组肌纤维间隙略有增大,有肌浆融合现象,另见小血管扩张,少许淋巴细胞浸润;附子+瓜萎组心肌肌纤维排列紊乱,肌浆融合,细胞核大小不等,核深染,灶性区域炎性细胞浸润。

  2.3 肝脏形态学

  正常组结构正常;附子组肝小叶结构略显紊乱,肝索上细胞排列不规则,可见较多慢性炎症细胞浸润,肝细胞水肿,细胞核大深染,可见双核;瓜萎组肝细胞肿胀,是正常体积的2~3倍,胞浆清亮呈空网状,肝细胞气球样变性,并有炎细胞浸润;附子+瓜萎组肝小叶结构紊乱,炎细胞浸润、肝细胞脂肪变性、胞浆内可见大量脂肪空泡,提示肝脏发生脂肪变性。

  2.4 肾脏形态学

  正常组结构正常;附子组肾近曲小管上皮细胞水肿,界限不清,小血管扩张充血,间质可见蛋白样水肿液,间质炎细胞浸润明显;瓜萎组也可见近曲小管上皮细胞肿胀,界限不清,肾远曲小管扩张样改变;附子+瓜萎组损伤不明显,少许区域小管上皮细胞肿胀,细胞界线不清,个别肾小管管腔狭窄。

  2.5 生化指标

  与正常组相比,附子组LDH、BUN、Cr明显升高(P<0.05或P<0.01);与附子+瓜萎组相比,瓜萎组LDH、CK有明显差异(P<0.05或P<0.01)。见表2。表2 各组血清生化检测指标

  3 讨 论

  检测脏器指数,是判断药物对脏器影响(尤其是毒性)的重要依据,旨在从大体上探索药物对机体重要脏器的影响。脏器指数增加表示脏器有充血、水肿、增生、肥大等变化,脏器指数下降则表示脏器有萎缩、退行性变化等〔6〕。生化检测血清LDH、CK活性以反映心肌受损的程度,检测ALT、AST的变化以反映肝细胞损伤程度,检测血清BUN、Cr以反映肾脏的排泄功能〔7〕,血清BUN及Cr升高提示肾脏的排泄功能减退。血清检测与大体标本形态学、光学显微镜下形态变化相互印证,为寻找药物毒性作用的靶器官提供依据。

  附子组大鼠心肌形态学观察有明显病变,加之LDH活性升高,证明有一定程度损伤;肝脏病理改变提示有肝细胞再生现象,但ALT、AST活性与对照组相比无显著性差异,可能是本实验在第14天进行检测时附子造成的肝脏急性损伤尚未修复,但生化检测值已恢复正常〔8〕;肾脏形态学观察有明显损伤,BUN和Cr较对照组亦明显升高。因此本实验显示附子单用有显著的心、肝、肾脏毒性,与向丽华等报道一致〔6〕。

  关于瓜蒌的毒性目前尚缺乏可令人信服的数据,如小鼠腹腔注射LD50,苗明三〔9〕记载为(363±33) g/kg,与黄美兰〔10〕报道的(31.69±1.14) g/kg相差10倍之多。本实验提示瓜蒌单用对肝脏损伤较明显,对心脏、肾脏具有一定的毒性。附子与瓜蒌能否合用也在“十八反”争议之列。本实验说明附子和瓜蒌合用后心脏毒性可能略有提高,对肝脏的影响不能下定论,对肾脏毒性不明显。

【参考文献】
    1 肖成荣,陈 鹏,王宇光,等.半蒌贝蔹及配伍乌头对大鼠肝细胞色素P450酶含量的影响〔J〕.天津中医药,2004;4:68.

  2 关天增,孙顺霖,常洪志,等.半蒌贝蔹及攻乌的实验研究〔J〕.河南中医药学刊,1994;9(5):28-9.

  3 杨 庆,聂淑琴,翁小刚,等.乌头、贝母单用及配伍应用体内、外抗肿瘤作用的实验研究〔J〕.中国实验方剂学杂志,2005;11(4):25-8.

  4 肖志杰,黄 华,曾春华,等.附子配贝母对大鼠心功能的影响〔J〕.江西中医学院学报,2005;17(2):50-1.

  5 朱林平.附子毒性研究概况〔J〕.江西中医药,2004;35(6):53-5.

  6 向丽华,陈燕萍,张 智,等.24味有毒中药长期毒性实验对大鼠脏器指数的影响〔J〕.中国中医基础医学杂志,2006;12(1):35-6,52.

  7 沈岳奋.生物化学检验技术〔M〕.北京:人民卫生出版社,2008:117-49.

  8 骆抗先.乙型肝炎基础和临床〔M〕.北京:人民卫生出版社,2003:365-9.

  9 苗明三,朱飞鹏,朱平生.实用中药毒理学〔M〕.第二军医大学出版社,2007:505.

  10 黄美兰,贝伟剑.大子栝楼和瓜蒌的作用比较〔J〕.广东药学,2000;10(1):47-9.

  (编辑 曹梦园)

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