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血清Hcy和hs-CRP水平在老年糖尿病肾病早期诊断中的意义

首席医学网      2012年07月22日 13:50:03 Sunday  
 
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作者:常 琼    作者单位:(青海大学附属医院老年病科,青海 西宁 810001)

【摘要】  目的 评价血清同型半胱氨酸(Hcy)和高敏C反应蛋白(Hs-CRP)测定在老年糖尿病肾病早期诊断中的应用价值。方法 酶联免疫吸附法测定24例尿蛋白正常组、25例微量蛋白尿组和21例大量蛋白尿组患者血清Hcy和hs-CRP水平,选25名健康老年人作为对照组。结果 尿蛋白正常、微量蛋白尿和大量蛋白尿较对照组,大量蛋白尿较微量蛋白尿组,大量蛋白尿组较尿蛋白正常组,血清Hcy和hs-CRP水平都显著升高(P<0.05);微量蛋白尿组较尿蛋白正常组血清Hcy水平显著增高 (P<0.05),血清hs-CRP水平无显著变化(P>0.05)。血清Hcy水平与卧床时间和抽烟无关(P>0.05),与性别、病程、体重指数、心血管疾病有关(P<0.05);血清hs-CRP水平与性别和卧床时间无关(P>0.05),与病程、抽烟、体重指数、心血管疾病有关(P<0.05)。结论 测定血清Hcy和hs-CRP水平对早期诊断老年糖尿病肾病有良好价值,Hcy在检测早期糖尿病肾脏损害程度方面敏感性优于hs-CRP。

【关键词】  老年糖尿病肾病;早期诊断;同型半胱氨酸;高敏C反应蛋白;酶联免疫吸附法

  糖尿病肾病治疗强调早期诊断、早期干预,因此早期诊断和肾脏微血管病变的判断对于老年糖尿病肾病的治疗具有重要意义。文献报道血清同型半胱氨酸(Hcy)与高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平与糖尿病肾脏微血管病变关系密切〔1,2〕。本文以尿蛋白/血肌酐值作为判断老年人糖尿病患者肾脏微血管病变情况的标准,分析血清Hcy和hs-CRP水平在老年糖尿病肾病早期诊断中的价值。

  1 材料与方法

  1.1 对象与分组

  选取青海大学附属医院老年病科2009年9月至2011年1月老年糖尿病住院患者70例,年龄61~86〔平均(73.7±9.8)〕岁,其中男37例,女33例。糖尿病诊断标准参考美国糖尿病学会(ADA)1997年糖尿病诊疗指南。患者按入院尿检尿白蛋白(ACR)结果分成三组:尿蛋白正常组(ACR<30 μg/mg)24例,微量蛋白尿组(30 μg/mg≤ACR<300 μg/mg)25例,大量蛋白尿组(ACR≥300 μg/mg)21例。另从我院体检中心体检人群中选取25名体检结果未见明显异常的老年体检人员(年龄≥60岁)作为对照组。本试验经医院伦理委员会批准,所有参与人员均在试验前签署知情同意书。

  1.2 主要试剂和仪器

  Hcy ELISA试剂盒,购自上海希美生物科技有限公司;hs-CRP ELISA试剂盒,购自厦门慧嘉生物科技有限公司;其他试剂均为国产分析纯。实验室用高速离心机,购自德国Eppendorf生物技术公司;实验室用96孔酶标板,购自上海江莱生物科技有限公司;实验室用SpectraMax M5多功能酶标仪一台,购自美国Molecular Devices分子仪器公司。

  1.3 血清制备

  患者采血时间皆选在入院后第二日清晨,空腹12 h于肘部取静脉血5 ml加入含有乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)的试管中;对照组空腹12 h于肘部取静脉血5 ml加入含有EDTA-K2的试管中。将上述含有抗凝血液样品的试管分别以3 000 r/min离心10 min,静置后取上层血清,稀释10倍作待测样品备用。

  1.4 ELISA法测定血清Hcy水平

  试剂盒内标准品浓度为200 μmol/L,按2倍比系列稀释,稀释后浓度为100,50,25,12.5,6.25,3.125 μmol/L。设置一个空白孔加入待测样品100 μl,立刻加入终止液100 μl,终止反应。取7种标准品和待测样品各100 μl加入酶标板反应孔底部,混匀、加盖后于37℃下温育120 min;弃液,在酶标板反应孔底部加入100 μl生物素标记抗体工作液,混匀、加盖后于37℃温育60 min;弃液后洗板5次,向酶标板反应孔底部加入100 μl辣根过氧化物酶标记亲和素工作液,混匀、加盖后于37℃温育60 min。弃液后洗板5次,在酶标板反应孔底部加入100 μl TMB溶液,混匀、加盖后于37℃温育30 min,加入50 μl终止液终止反应。用酶标仪测出各孔在450 nm处OD值,以标准品测定OD值绘制标准曲线,计算样品血清Hcy水平。

  1.5 血清hs-CRP水平测定

  采用ELISA法测定,详细操作步骤参考血清Hcy水平测定。

  1.6 统计学方法

  应用SPSS17.0统计软件进行分析,计量资料用x±s表示,组间比较采用方差分析。

  2 结 果

  2.1 糖尿病组(尿蛋白正常组+微量蛋白尿组+大量蛋白尿组)血清Hcy和hs-CRP水平与一般情况的关系

  老年糖尿病患者血清Hcy水平与卧床时间和抽烟情况无明显关联(P>0.05),与患者性别、病程、体重指数、心血管疾病、抗生素使用情况有关(P<0.05)。老年糖尿病患者血清hs-CRP水平与性别和卧床时间没有明显关联(P>0.05),与患者的病程、抽烟情况、体重指数、合并心血管疾病情况、抗生素使用情况有关(P<0.05)。见表1。表1 血清Hcy和hs-CRP水平与临床特征的关系

  2.2 各组血清Hcy及hs-CRP水平检测结果比较

  方差分析显示:尿蛋白正常组、微量蛋白尿组和大量蛋白尿组血清Hcy、hs-CRP水平都显著高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。大量蛋白尿组血清Hcy和hs-CRP浓度都显著高于微量蛋白尿组和尿蛋白正常组,微量蛋白尿组血清Hcy水平显著高于尿蛋白正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);微量蛋白尿组血清hs-CRP水平与尿蛋白正常组没有明显区别,差异无统计学意义(P>0.05)。表明血清Hcy和hs-CRP水平对诊断老年糖尿病肾病都有良好的临床应用价值,但血清Hcy水平测定在鉴别单纯糖尿病组和微量蛋白尿组肾脏微血管病变程度时敏感性高于hs-CRP。见表2。表2 不同组别血清Hcy和hs-CRP水平

  3 讨 论

  Hcy是甲硫氨酸的代谢中间产物,作为人体一种非必需含硫氨基酸,Hcy在正常血液中主要以蛋白结合体形式存在,只有少部分以游离形式存在。Hcy是一种反应性血管损伤氨基酸,血液中高含量的Hcy通过氧化应激、致炎作用和免疫相关因素等介导血管内皮细胞的损伤,促进血管平滑肌增生〔3〕,因此血清Hcy水平升高与多种全身微血管病变有关。已有研究证实,高Hcy血症是心脑血管疾病的独立危险因素〔4〕,降低血液中Hcy水平有助于降低心脑血管疾病的发生率。Buysschaert等〔5〕研究显示糖尿病肾病患者血清中Hcy高表达,认为Hcy参与了糖尿病肾病的肾脏损害,高浓度的Hcy会损伤肾小球微血管的内皮细胞、促进肾脏系膜细胞的增殖,也是糖尿病肾病的独立危险因素。本研究与上述报道一致:三组老年糖尿病患者血清Hcy水平都明显高于健康对照组,且血清Hcy的水平改变与患者尿蛋白/肌酐值变化相一致,说明血清Hcy水平与糖尿病肾病的肾脏损害程度是平行的,测定血清Hcy水平对早期诊断老年糖尿病肾病具有临床应用价值。

  hs-CRP是一种由肝细胞合成和分泌的非糖基化聚合蛋白,作为一种急性损伤、感染或炎症刺激的急性时相反应蛋白,hs-CRP是一种非特异性的炎症血清生物标记因子〔6〕。Stehouwer等〔7〕在一个9年的前瞻性随访研究中,对328例糖尿病肾病患者的尿蛋白排泄率和血清hs-CRP水平进行了监测,发现二者具有相关性,进而提出糖尿病肾病是hs-CRP参与介导的长期慢性炎症反应病理过程的理论。Cao等〔8〕通过实验证实,2型糖尿病病人的肾脏微血管病变程度与hs-CRP的慢性炎症作用有关,血清hs-CRP水平升高是2型糖尿病肾脏微血管病变的独立危险因素。本研究发现,老年糖尿病各组和大量蛋白尿组血清hs-CRP水平均显著高于对照组,差异都具有统计学意义(P<0.05),因此血清hs-CRP水平对于老年糖尿病肾病的早期诊断是具有临床应用价值的,这与先前的报道是一致的。但老年糖尿病微量蛋白尿组与尿蛋白正常组相比,血清hs-CRP水平没有明显变化,而血清Hcy水平在微量蛋白尿组却明显高于尿蛋白正常组。因此,推断血清hs-CRP水平对于老年糖尿病早期肾脏微血管病变程度诊断的敏感性低于Hcy。分析认为可能与hs-CRP作为一种非特异性炎症标记因子有关,老年患者本身具有多方面的致使血清hs-CRP水平升高的因素存在,如高龄、长期抽烟、感染、合并心血管疾病等,这些使得血清hs-CRP在判断早期糖尿病肾脏微血管病变程度方面敏感性下降。因此,老年患者的血清hs-CRP水平升高与其病程、吸烟情况、体重指数、合并心血管疾病情况等密切相关。

  综上所述,血清Hcy和hs-CRP水平与老年糖尿病肾病的发生和发展密切相关,二者的检测对临床早期诊断老年糖尿病肾病有良好的临床应用价值。血清Hcy升高的水平对于判断肾脏微血管病变情况敏感性高于hs-CRP。但目前有关Hcy和hs-CRP与老年糖尿病肾病发生关系的具体分子机制研究结果尚不多见,这方面的研究将有助于进一步了解老年糖尿病肾病的发病机制,并对老年糖尿病的诊治提供新的线索。

【参考文献】
    1 Van Hecke MV,Dekker JM,Nijpels G,et al.Homocysteine,S-adenosylmethionine and S-adenosylhomocysteine are associated with retinal microvascular abnormalities:the Hoorn Study〔J〕.Clin Sci (Lond),2008;114(7):479-87.

  2 Gomes MB,Nogueira VG.Acute-phase proteins and microalbuminuria among patients with type 2 diabetes〔J〕.Diabetes Res Clin Pract,2004;66(1):31-9.

  3 Finch JM,Joseph J.Homocysteine,cardiovascular inflammation,and myocardial remodeling〔J〕.Cardiovasc Hematol Disord Drug Targets,2010;10(4):241-5.

  4 Jamaluddin MS,Yang X,Wang H.Hyperhomocysteinemia,DNA methylation and vascular disease〔J〕.Clin Chem Lab Med,2007;45(12):1660-6.

  5 Buysschaert M,Dramais AS,Wallemacq PE,et al.Hyperhomocysteinemia in type 2 diabetes:relationship to macroangiopathy,nephropathy,and insulin resistance〔J〕.Diabetes Care,2000;23(12):1816-22.

  6 Howren MB,Lamkin DM,Suls J.Associations of depression with C-reactive protein,IL-1,and IL-6:a meta-analysis〔J〕.Psychosom Med,2009;71(2):171-86.

  7 Stehouwer CD,Gall MA,Twisk JW,et al.Increased urinary albumin excretion,endothelial dysfunction,and chronic low-grade inflammation in type 2 diabetes:progressive,interrelated,and independently associated with risk of death〔J〕.Diabetes,2002;51(4):1157-65.

  8 Cao C,Wan X,Chen Y,et al.Metabolic factors and microinflammatory state promote kidney injury in type 2 diabetes mellitus patients〔J〕.Ren Fail,2009;31(6):470-4.

  (编辑 袁左鸣/徐 杰)

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