您所在位置: 首页 > 期刊 > 过刊浏览 > 大学学报> 《新疆医科大学学报》> 2010年10月33卷10期>论著> 文章详情

没食子提取工艺的研究

首席医学网      2010年11月23日 10:44:58 Tuesday  
 
  加入收藏夹   官方投稿信息

作者:马萍萍1 聂继红2, 季志红3, 毛旭文4, 王萍2    作者单位:(新疆医科大学1中医学院, 2附属中医医院, 3新疆奇康哈博维药有限公司, 4药学院, 新疆乌鲁木齐830000)

【摘要】  目的优选没食子的水提工艺。方法以鞣质含量、没食子酸含量和浸膏得率为评价指标,选择加水倍量(倍)、  提取时间(h)和提取次数为考察因素,采用单因素试验及正交设计法优选没食子的水提工艺。结果最优工艺为用8倍量水,回流提取3次,每次2.5 h。结论优选得到的提取工艺简易、稳定,提取率高。

【关键词】  没食子; 提取工艺; 正交试验; 高效液相色谱法

  Abstract: ObjectiveTo study the optimal condition for water extraction process of Turkish Galls.MethodsThe extraction content of tannin, gallic acid and extractum yield were used as the index andorthogonal test design was used to choose the best extraction process.The effects of singleparameters such as the extraction time, the extraction frequency, the times of water were separatelyevaluated by synthesizing multiple guideline method. ResultsThe best extraction process was with 8times of water, extracted 3 times, 2.5 hour for each. ConclusionThe optimized process forextracting is feasible, stable and highly efficient.

  Key words: turkish galls; extraction process; orthogonal test design; high performance liquidchromatography (HPIC)

  没食子是由没食子蜂的幼虫寄生于没食子树幼枝上所产成的虫瘿。没食子药用历史悠久,是我国新疆维吾尔医常用药,具有固涩、燥湿、止血、消炎、防腐之功效。本课题组拟采用现代技术和工艺,根据没食子的有效成分及其理化性  质,采用单因素及正交试验设计优选其提取工艺,为其制剂的进一步研究奠定基础。

  1仪器与试药

  1.1仪器Waters 1515高效液相色谱仪 (美国Waters公司),TU-1901双光束紫外可见分光光度(北京普析通用仪器有限责任公司),AE100-SNR电子天平(上海恒平科学仪器有限公司),SK2200LH超声波清洗仪(上海科导超声仪器有限公司)。

  1.2试药没食子药材由新疆奇康哈博维药有限公司提供,经鉴定符合《维吾尔药材标准》1993年版上册项下规定,没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110831-200803,供含量测定用),甲醇为色谱纯,水为纯化水,其它试剂均为分析纯。

  2方法与结果

  2.1浸膏得率的测定[1]精密吸取制备所得提取液20 ml,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴蒸干后,于105℃干燥3 h,置干燥器中冷却0.5 h,迅速精密称重,重复3次,计算得到浸膏得率。

  2.2没食子酸含量测定方法

  2.2.1色谱条件Kromasil 100-5C18色谱柱(5 μm,4.6 mm×250 mm);流动相:甲醇—四氢呋喃—醋酸—水(0.08∶.64∶2∶97.28);检测波长271 nm;柱温(30±5)℃ ;流速1.0 ml/min。

  2.2.2对照品溶液与供试品溶液的制备对照品溶液的制备:精密称取干燥至恒重的没食子酸对照品30 mg,置25 ml量瓶  中,加甲醇至刻度,摇匀, 作为储备液(1.2 mg/ml)。供试品溶液的制备: 精密称取没食子粗粉10 g,按设定方案进行提取,滤过,滤液经微孔滤膜(0.45 μm)滤过后,取10 μl注入高效液相色谱仪测定,供试品溶液高效液相色谱图见图1。图1供试品溶液高效液相色谱图

  2.2.3线性关系的考察 精密吸取没食子酸对照品储备液0.1、0.5、1.0、2.0、4.0 ml分别置10 ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,取10 μl依次注入高效液相色谱仪,测定。以对照品进样浓度(μg/ml)为横坐标, 峰面积积分值为纵坐标计算得回归方程:Y=19 167.81 589X-17 014.618 46(r=0.999 9)。结果显示没食子酸在0.012 0~0.480 mg/ml浓度之间呈良好的线性关系。对照品溶液高效液相色谱图见图2。图2对照品溶液高效液相色谱图

  2.2.4精密度试验取同一对照品溶液在同一天内重复进样5次,并连续测定5 d,计算日内及日间精密度(RSD)。结果日  内RSD=0.30%,日间RSD=0.76%,表明本方法精密度良好。

  2.2.5稳定性试验取同一供试品溶液,分别在0、2、4、6、8 h进样测定。结果其RSD=0.93%,表明供试品溶液在8 h内稳  定。

  2.2.6重复性试验取同一批样品6份,按2.1.2项下方法制备,按2.1.1项下色谱条件进行测定,记录其峰面积,  RSD=0.85%。

  2.2.7加样回收率试验取2.1.1项下一定量经测定已知含量的样品9份,分别置50 ml圆底烧瓶中,分别精密加入高、中、  低3种浓度的没食子酸对照品溶液,按供试品溶液制备方法制成供试品溶液, 按2.1.1项下色谱条件进行含量测定。结果平均加样回收率为99.37%,RSD=1.87%。

  2.3鞣质的含量测定[2]

  2.3.1对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品50 mg,置100 ml棕色量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,精密量取5 ml,置50 ml棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,作为对照品储备液,即得(每1毫升中含没食子酸0.05 mg)。

  2.3.2标准曲线的制备精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml,分别置25 ml棕色量瓶中,各加入磷钼钨酸试液1 ml,再分别加入水11、10、9、8、7 ml,用29%碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,放置30 min以相应的试剂为空白,照分光光度法(2010版药典一部,附录V A),在760 nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程为Y=0.107 8X-0.003 158(r=0.999 5),表明没食子酸在2~10 μg/ml范围内呈良好的线性关系。

  2.3.3样品测定精密量取没食子提取液50 ml,置250 ml棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,过滤,弃去初滤液,精密量取续滤液20 ml,置100 ml棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得。总酚测定:精密量取供试品溶液2 ml,置25 ml棕色量瓶中,照标准曲线的制备项下的方法,自“加入磷钼钨酸试液1 ml”起,加水10 ml,依法测定吸光度,从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg),再根据稀释倍数计算,即得。不被吸附的多酚测定:精密量取供试品溶液25 ml,加入已盛有干酪素0.6 g的100 ml具塞锥形瓶中,密塞,置30℃水浴中保温1 h,时时振摇,取出,放冷,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液2 ml,置25 ml棕色量瓶中,照标准曲线的制备项下的方法,自“加入磷钼钨酸试液1 ml”起,加水10 ml,依法测定吸光度,从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg),再根据稀释倍数计算,即得。计算公式为:鞣质的含量(%)=(总酚量-不被吸附的多酚)/取样量×100%。

  2.4正交试验设计[3]根据单因素试验结果,确定影响提取工艺的3个主要因素,每个因素取3个水平(表1)。以总鞣质含量、没食子酸含量及浸膏得率为指标,采用综合评分法,权重系数分别为鞣质含量为40,没食子酸含量为40,浸膏得率为20,满分100。综合评分=(总鞣质的含量/最大总鞣质的含量)×40+(没食子酸的含量/最大没食子酸的含量)×40+(最小浸膏  得率/浸膏得率)×20。选L9(34)正交试验表进行实验,从直观分析中可看出影响提取的因素依次为B>A>C,最佳提取工艺为A3B3C1,结果见表2。表1因素水平表表2L9(34)正交试验安排及试验结果

  2.5方差分析与结果方差分析结果表明,提取时间和提取次数对提取效果有显著影响(P<0.05)。结合大工业生产,  确定最优工艺为A3B3C1,即采用8倍量水,回流提取3次,每次2.5 h(表3)。表3方差分析结果

  2.6验证试验精密称取一定量药材粗粉,按最优提取条件进行回流,提取后按样品处理方法同2.1.2项样品制备法,测定其鞣质含量、没食子酸含量及浸膏得率并计算综合评分。验证试验结果见表4。结果表明,该工艺稳定可行。表4验证试验结果

  3讨论

  在确定供试品溶液的 HPLC色谱条件时,首先采用了甲醇—0.05%磷酸(5∶95)[4],结果样品峰与杂质峰未能有效分离。当流动相改为甲醇—四氢呋喃—磷酸—水(0.1∶0.5∶0.5∶98.9)时,没食子酸峰与其他组分色谱峰能较好地分离,但基线不平稳,不能准确积分。经反复试验,当流动相改为甲醇—四氢呋喃—醋酸—水(0.08∶0.64∶2∶97.28)时,没食子酸峰与其他组分色谱峰能较好地分离,并且峰形较好,满足实验要求。本试验采用单因素试验及正交设计试验,最终确定8倍量水,回流提取3次,每次2.5 h的方法为最优工艺。优选得到的没食子提取工艺简易、稳定、可行,为该药材的进一步研究提供依据。没食子中的主要有效成分为鞣质,但是易水解成没食子酸,其结构稳定。因此,将鞣质含量、没食子酸含量和浸膏得率作为筛选提取工艺评价指标,分配指标的权重系数分别为0.4、0.4和0.2。

【参考文献】
   [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:化学工业出版社, 2010: 附录 XA62.

  [2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:化学工业出版社, 2010:附录 XB62.

  [3]周玉平,谢健敏,张纪兴.正交试验优选地锦草中没食子酸的提取工艺[J].国际医药卫生导报,2008,14(5):72-75.

  [4]任源,堵年生. HPLC测定没食子中没食子酸的含量[J].华西药学杂志,2005,20(1):71-72.

  订阅登记:

请您在下面输入常用的Email地址、职业以便我们定期通过邮箱发送给您最新的相关医学信息,感谢您浏览首席医学网!

邮箱:    专业:    职称:      

医学期刊医学会议医学专区医学护理