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新疆石榴皮乙酸乙酯提取部位的制备和初步鉴定

首席医学网      2010年11月23日 10:45:44 Tuesday  
 
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作者:木合布力·阿布力孜1毛新民2, 麦合木提·阿卜杜力3, 布买拉·斯的克3     作者单位:(新疆医科大学药学院1药物化学教研室, 2药理教研室, 3临床药学2007-1班, 新疆乌鲁木齐830011)

【摘要】  目的对新疆石榴皮的乙酸乙酯提取部位进行制备和鉴定。方法用乙酸乙酯回流提取制备浸膏,用化学显色法和  薄层色谱法对提取物进行鉴定。结果最佳提取条件:固液比1∶20,提取温度80℃,提取次数3次,提取时间分别为3、2、1.5 h,出膏率4.3%;系统预试验结果显示,提取物可能含有黄酮类、生物碱、有机酸、酚类和挥发油等成分;以展开剂为正丁醇- 醋酸-水(4∶1∶8)的硅胶薄层色谱板上显示4个鲜明的薄层斑点(Rf=0.3~0.5)。结论为新疆石榴皮乙酸乙酯提取部位的制备、化学成分分析、质量标准研究及抗糖尿病产品开发奠定重要基础。

【关键词】  新疆石榴皮; 乙酸乙酯提取物; 化学和色谱鉴定

 Abstract ObjectiveTo prepare and identify initially the acetic acid extract of Xinjiang pomegranatepeel. MethodsAcetic acid extract was prepared from pomegranate peel by reflux-heating method;chemical and chromatographic (TLC) identification were performed. ResultsThe optimal extractioncondition was: solid/liquid ratio 1∶20, 80℃/3 h, extraction yield 4.3%; the chemical identificationshowed that the extract possible contained flavonoid, alkaloids, phenolic compounds, organic acid andvolatil oil; the result of TLC, n-butyl alcohol-acetic acid-water (4∶1∶8) as the developingsolvent, shows 4 clear TLC spots (Rf=0.3~0.5). ConclusionThis study could provide a fundamental basisfor preparation, structure analysis, quality control and pharmacological study of acetic acid extractof pomegranate peel, for further development of anti-diabetic new agent.

  Key words: Xinjiang pomegranate peel; acetic acid extract; chemical and chromatographic analysis

  石榴(Punica granatum L.)为石榴科(Punicaceae) 石榴属小乔木的果实[1], 是维吾尔药品标准[2]中收录的一味药材, 其根、叶、花、果实、果皮、种子均可入药,具有广泛的药用价值。最近的研究表明, 石榴所具有的抗癌、降血糖、免疫调节、改善心血管系统作用等功效主要与石榴皮中所含的多酚类成分有关[3]。石榴皮多酚类化合物的生物活性及对人体的保健预防作用日益受到人们的关注, 其清除机体内自由基、抗脂质氧化、延缓机体衰老、预防心血管系统疾病、防癌、抗辐射等生物活性功能的发现, 使对多酚的研究和应用越来越受到重视, 石榴中的多酚类成分主要是黄酮类化合物、浓缩单宁和水解单宁等[3]。本课题组在前期研究中,经对石榴皮的不同溶剂提取部位进行了制备和降血糖活性的研究,结果发现石榴皮的乙酸乙酯提取部位显示较强的降血糖作用,在抗糖尿病新产品研究中显示潜在的应用开发价值。本研究对石榴皮制备乙酸乙  酯提取部位进行制备研究,对提取条件进行考察和筛选,并通过化学系统预实验法和薄层色谱法,对提取物中所含化学物质的类型进行鉴定,为药理学实验研究、化学成分分析及石榴皮的综合开发利用奠定一定基础。

  1材料与方法

  1.1材料新疆和田石榴皮(将药材切片、50℃干燥3~4 h,粉碎,过20目筛,备用),TCL板(Silicagel 60 F254,ERCK)。

  1.2仪器RE-52A 旋转蒸发仪,水浴锅,循环水式真空泵,干燥箱。

  1.3试剂芦丁标准品(购于卫生部中国药品生物鉴定所),鉴定试剂有碘化铋钾、苦味酸、磷钼酸、三氯化铁、镁粉 、浓盐酸、浓硫酸、硅钨酸、溴甲酚緑、三氯化铝、乙酸镁、铁氰化钾、异羟肟酸铁、二硝基苯甲酸、四氢硼钠、α-萘酚、硫酸铜、明胶、冰醋酸、氢氧化钠等。主要溶剂有乙酸乙酯。以上试剂均为分析纯。

  1.4石榴皮乙酸乙酯提取物的制备取药材20 g,加适量乙酸乙酯,在水浴加热回流,过滤;滤渣按同法再提取2次,合并3次提取液,用旋转蒸发仪减压浓缩至干,并将提取物干燥,称重,计算出膏率。利用简单的单因素分析法,以出膏率为参考指标,对固液比、提取温度、提取次数和提取时间进行考察,以优化提取条件。

  1.5鉴定试剂的配备按照文献[4]中天然药物化学成分的系统预试试剂的配制方法进行制备。

  1.6化学定性研究 石榴皮乙酸乙酯提取物分别与不同化学试剂反应,根据所产生的特定颜色或沉淀反应判断提取物中  的化学成分类型[5]。

  1.6薄层色谱法鉴定

  1.6.1TLC色谱条件硅胶GF254 薄层板为固定相;展开剂按文献[6]方法进行筛选,并选定对各斑点的分离效果较好的展开剂正丁醇-醋酸-水(4∶1∶8);对照品用芦丁(10 mg 芦丁溶于50 ml 30%乙醇中);以1%AlCl3乙醇溶液为显色剂;薄层板放在紫外灯下观察各样品斑点,并测定Rf值。

  2结果与分析

  2.1提取物的特征黄棕色固体,香味。

  2.2提取条件的优化以提取物的出膏率为指标,根据反复摸索提取条件(固液比、提取温度、提取次数和提取时间) ,筛选出最佳提取条件为:固液比1∶20,提取温度为回流温度(80℃),提取次数3次,提取时间分别为3、2、1.5h,此时的出膏率最高,为4.3%。

  2.3化学鉴定结果系统定性试验结果显示,新疆石榴皮乙酸乙酯提取物可能含有黄酮类(包括黄酮苷)、生物碱、有机酸、酚类和挥发油等成分,见表1。表1石榴皮乙酸乙酯提取物的定性试验结果

  2.4薄层鉴定结果样品溶液在以正丁醇- 醋酸-水(4∶1∶8)为展开剂的硅胶GF254薄层板上主要显示4个鲜明的薄层斑点。各斑点的比移值都比对照品芦丁的小,而且喷雾AlCl3溶液后,显示更鲜明的黄色斑点(可能是黄酮类化合物所显示),见图1。A: 为对照品芦丁斑点; B: 为样品斑点图1样品薄层特征

  3结论

  本研究中,根据新疆石榴皮提取物的前期药理实验结果,以有效成分的追踪调查为目的,对石榴皮乙酸乙酯提取物进  行制备,对提取物的制备工艺进行考察,并通过化学预实验及薄层层析等方法,对提取物的化学成分类型及其色谱特征进行研究。以出膏率为指标,根据反复摸索提取条件,筛选出最佳提取条件为:固液比1∶20,提取温度为回流温度(80℃),提取次数3次,提取时间分别为3、2、1.5 h,此时的出膏率为4.3%,即石榴皮乙酸乙酯部位的出膏率较低,主要集中的可能是具有降血糖活性的一些黄酮类和生物碱类组分。系统化学定性试验结果显示,新疆石榴皮乙酸乙酯提取物可能主要含有黄酮类(包括黄酮苷)、生物碱、有机酸、酚类和挥发油等成分。该提取物在以正丁醇- 醋酸-水(4∶1∶8)为展开剂的硅胶GF254薄层板上主要显示4个薄层斑点,用AlCl3显色后,显示更鲜明的黄色斑点,可能是黄酮类化合物所显示。本实验结果对新疆石榴皮乙酸乙酯提取部位的化学成分分析及质量标准研究以及新产品开发中具有重要参考价值。

【参考文献】
    [1]李海霞,王钊,刘延泽.石榴科植物化学成分及药理活性研究进展[J] .中草药, 2002,33(8):765-769.

  [2]中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药品标准维吾尔药分册[M].乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社,1999:18.

  [3]周跃勇, 王岸娜, 吴立根. 从猕猴桃中提取多酚的研究[J] .食品研究与开发,2007,28(3):56-60.

  [4]肖崇厚. 中药化学[M]. 上海: 上海科学出版社, 1997:595-6011.

  [5]帕丽达·阿布力孜, 张笑颖, 海里茜,等. 新疆石榴皮和石榴籽化学成分预试验[J]. 海峡药学,2007,19(1):52-53.

  [6]吴春霞,马厉芳,阿不都拉·阿巴斯. 小甘菊花有效成分的初步研究 [J]. 食品科学, 2007, 28(5):287-289.

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