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罗勒提取物对肾性高血压大鼠的影响

首席医学网      2009年04月16日 14:19:56 Thursday  
 
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作者:古孜力努尔·依马木, 邬利娅·伊明, 依巴代提·托合提, 努尔江·肉孜,阿迪力·阿不都热合曼,蒋进, 艾尼瓦尔·吾买尔    作者单位:新疆医科大学药学院药理学教研室, 新疆乌鲁木齐830011; 新疆昌吉州人民医院药剂科, 新疆昌吉831100

【摘要】    目的:通过验证罗勒(全草)提取物(OBL)对肾性高血压模型大鼠的降压作用,探讨OBL的降压作用机理。方法:正常SpragueDawley(SD)大鼠适应性喂养1周后测基础血压。然后进行左肾动脉狭窄手术。手术后4周,形成两肾一夹(2K1C)肾性高血压。将高血压大鼠60只随机分成5组:罗勒提取物高剂量组(H,400 mg/kg)、罗勒提取物中剂量组(M,200 mg/kg)、罗勒提取物低剂量组(L,100 mg/kg)、卡托普利组(Cap,30 mg/kg)、高血压模型组(Model)。从肾动脉狭窄手术后4周开始灌胃给予相应药物,持续4周,每周末测血压;外加假手术组(Sham)10只。处死动物取血测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素(ET)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。结果:两肾一夹(2K1C)术后4周,假手术组血压为(138±2.04)mmHg,模型组血压为(201±3.69)mmHg,两组血压差异有统计学意义(P<0.05)。同时AngⅡ、ET以及MDA含量明显增高;而SOD活性降低。给予罗勒提取物后血压(收缩压和舒张压)均有下降。ET、MDA明显下降、而SOD活性增高(P<0.05),且作用强于卡托普利组(P<0.05)。同时AngⅡ也明显下降。结论:罗勒提取物对肾性高血压大鼠具有降压作用,其降压作用机制可能与通过抗氧化反应来保护内皮细胞,改善血管内皮功能紊乱,抑制缩血管物质(内皮素、血栓素A2、血管紧张素Ⅱ)的释放有关。

【关键词】  罗勒 肾性高血压 肾素 血管紧张素系统 内皮素

  Antihypertensive effects of  Ocimum Basilicum L (OBL)  on renal hypertensive rats

  Guzilinuer·Yimamu, Wuliya·Yimin, Yibadeiti·Tuheti, et al

  (Department of Pharmacology,  Xinjiang Medical  University, Urumqi 830011, China)

  Abstract: Objective: To investigate the effects of the extraction of Ocimum basilicum L (OBL) on renal hypertensive rats and investigate its mechanism. Methods:  SD rats received food and water adlibitum in 1 week of acclimation. After that baseline blood pressure (systolic and diastolic blood pressure) was measured by noninvasive tail cuff photosensor under aseptic conditions, thirty general anesthesia rats were given a modifided 2 kidney1 clip (2K1C) operation while six rats were shamoperated (the animals received identical treatment without left renal artery ligation). Four weeks later,   hypertensive  rats were randomly allocated to four groups such as OBL (higher, 400 mg/kg), OBL(middle, 200 mg/kg), OBL(lower, 100 mg/kg), captopril (cap, 30 mg/kg) and model group after allocation, the treatment period was 4 weeks. The blood pressure was measured weekly. At sacrifice, blood was harvested to measure the levels of angiotensinⅡ(AngⅡ), superoxide dismutase (SOD), malonaldehyde(MDA) and endothelin (ET) at the end of the 4th week. Kidneys and hearts were collected to observe the patho1ogical changes of arteriole too. Results: Four weeks after 2K1C operation, the blood pressure of the 2kidney1clip operation group increased significantly (201±3.69) mmHg vs (138±2.04) mmHg of sham group (P<0.05). And the levels of AngⅡ,  MDA,  ET was slightly increased in plasma. SOD was decreased significantly. Treated with captopril and OBL, the blood pressure (systolic blood pressure and diastolic blood pressure) decreased significantly and continually (P<0.05). During the course of administration, the levels of AngⅡ, MDA and ET were slightly decreased in plasma. Mean while, SOD in plasma increased respeetively (P<0.05). Conclusions: OBL can reduce the blood pressure of the renal hypertensive rat, Which is likely related to through the antioxidate reaction,  to improve the blood vessel endothelium function. It should be more than one antihypertensive target of OBL. 

  Key words: Ocimum Basilicum L (OBL);  renal hypertension; reninangiotensin system;  endothelin

  高血压是一种以体循环动脉压升高为主要特点的临床综合征,可导致靶器官如心脏、肾脏、脑和血管的损害,并伴有全身代谢性改变[1-2]。高血压病是一种常见病、多发病 ,并能导致心、脑和肾等重要脏器的损伤,严重危害人类的健康。因此寻找安全有效的防治高血压病的药物成为一个普遍关心的问题。现已证实,罗勒具有抗血栓、抗血小板聚集、抗氧化、降血脂、抗溃疡等诸多生理功效[3-4],本实验旨在研究罗勒提取物对肾性高血压大鼠的降压作用及其作用机制。

  1材料和方法

  1.1实验动物健康SD大鼠70只,雄性,体重(200±20) g,由新疆医科大学实验动物中心提供。动物饲养于干燥、通风、安静的环境中,每日饲以本校动物所提供的颗粒全价饲料,饮清洁自来水。

  1.2试剂和仪器罗勒提取物:由新疆医科大学药理教研室提供,1 kg药材相当于120 g浸膏.卡托普利(批号:0601002);AngⅡ测定盒和ET测定盒(由北京北方生物技术研究所生产);SOD试剂盒和MDA试剂盒(由南京建成生物工程研究所生产)。BP6动物无创血压测试仪,TDL802B离心机。

  1.3模型的建立及分组

  1.3.1两肾一夹(2K1C)高血压模型的制备[5]测基础血压后,按经典造模方法进行:取健康雄性SD大鼠60只,无菌操作条件下,用3%戊巴比妥30 mg/kg腹腔注射麻醉,仰卧位固定,备皮,皮肤消毒后于剑突下1.5 cm沿腹中线切开皮肤及肌层,将分离左肾动脉,在近主动脉端放置U型银夹[6-7],内径0.25 mm,常规缝合切口,术后肌肉注射青霉素5万单位/只,以预防感染。术后置于干净笼内饲养。手术过程中腹腔脏器不移出腹腔外,右侧肾脏未触及。另10只SD大鼠,手术方法与模型组相同,但只分离左肾动脉,不套银夹,作为假手术对照组。

  1.3.2分组及给药参照上海高血压研究所顾德官等的标准[8-9],术后4周,收缩压>140 mmHg者即为两肾一夹型模(2K1C)。肾性高血压大鼠共60只,随机分为5组,每组12只:假手术组、肾性高血压模型组、罗勒低剂量组(100 mg/kg)、罗勒中剂量组(200 mg/kg)、罗勒高剂量组(400 mg/kg)、卡托普利组(30 mg/kg)。每日一次灌胃给药,连续给药4周。每周测体重一次,根据体重随时调整给药量。大鼠饲养于恒温(24±2)℃室内通风柜内,每笼5只标准饲料饲养,自由饮水。

  1.4指标检测

  1.4.1血压测定[10-11]每周末连续测尾动脉收缩压和舒张压3次,取其平均值为该周血压。在干燥、安静的环境中,无创血压测试仪预热后,将大鼠置恒温加热箱中预热10~15 min后测收缩压、舒张压,每个时点测3次,取平均值。血压测定在以下时点进行:手术前、术后第4周末、给药后第1周末、2周末、3周末、4周末。给药后血压测定在末次给药后1 h开始进行。

  1.4.2血液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及内皮素(ET)测定第4周灌胃1 h后测血压,测完血压后次晨,各组大鼠以3%戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔麻醉后,经腹主动脉插管采血。分A、B两管,A管不抗凝,测SOD、MDA。B管内预先加入10%EDTA二钠30 μl 和抑肽酶40 μl,将血加入后混匀4℃, 3 000 r/min离心10 min,分离血浆,-20℃以下保存待测,测定血浆中SOD、MDA及ET的含量。

  1.4.3血浆中AngⅡ含量测定测定步骤如下:(1)酶抑制剂的配制:按取血1 ml计,每管加10 μl  0.3 mmol/L EDTA二钠、10 μl  0.34 mmol/L 8轻基哇琳、5 μl  0.32 mmol/L二琉基丙醇;(2)采血:经腹主动脉采血1 ml左右,迅速注入放在冰水冷却的含酶抑制剂的抗凝管中,摇匀、即刻再放回冰水中冷却,待离心时取出。4 ℃1 000 r/min 离心5 min,分离血浆。此操作在15 min内完成。然后,血浆放入-20℃低温冰箱保存待测,测定血浆AngⅡ含量。

  1.4 .4统计学处理采用SPSS14.0统计软件,所有数据均以(±s)表示,各组组间差异比较采用单因素方差分析。经方差齐性检验后,方差不齐的采用Tamhane′s方法检验各组间差异的显著性;方差齐同的则采用LSD检验或SNK检验各组间差异的显著性。检验水准α=0.05。

  2结果

  2.1各组大鼠体重变化大鼠饲养于干燥、通风、安静的环境中,每日喂食颗粒全价饲料,自由饮水后,一般情况良好,体重持续增加。各组大鼠体重增长速度相近,经方差分析,个体间无显著性差异,组间也无显著性差异,证明实验方法稳定可靠,见表1。

  表1各组大鼠体重的变化(略)

  2.2罗勒提取物对血压的影响大鼠施行2K1C手术后,模型组与假手术组比较,血压平均值明显升高(P<0.05),表明造模成功。与模型组比较,罗勒高、中、低剂量组和卡托普利组均有下降,见表2。

  表2罗勒提取物对大鼠血压的影响(略)

  注:与假手术组比较, *P<0.05;与模型组比较, #P<0.05

  2.3罗勒提取物对血浆ET的影响大鼠施行2K1C手术后,模型组与假手术组比较,血浆中ET的含量显著升高(P<0.05),与模型组比较,罗勒高、中、低剂量组和卡托普利组显著下降(P<0.05),见表3。

  表3罗勒提取物对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ和内皮素(ET)的影响(略)

  注:与假手术组比较,*P<0.05; 与模型组比较, #P<0.05; 与卡托普利组比较, △P<0.05

  2.4罗勒提取物对SOD和MDA的影响模型组与假手术组比较,血清中SOD的含量显著下降(P<0.05),而血清中MDA含量显著升高(P<0.05);与模型组比较,罗勒高、中剂量组和卡托普利组血清中SOD的含量显著升高,而血清中MDA含量显著下降(P<0.05),见表4。

  2.5罗勒提取物对血浆AngⅡ的影响大鼠施行2K1C手术后,模型组与假手术组比较,血浆中AngⅡ含量显著升高(P<0.05),与模型组比较,罗勒中剂量组和卡托普利组显著下降(P<0.05),见表4。
  
  表4罗勒提取物对超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的影响(略)

  注:与假手术组比较, *P<0.05;与模型组比较, #P<0.05

  3讨论

  罗勒是维吾尔医应用历史悠久的常用药材之一。罗勒的化学成分主要为挥发油、黄酮,香豆素、甾体化合物等,其中挥发油的含量最大。全草性为:有开窍、降血脂、苏醒、祛风散肿、祛痰作用。用于心悸失眠、房颤、咳嗽哮喘、脾胃湿寒、口腔炎、目赤流泪、尿路结石、催乳、浮肿。种子性为:一级干热,有止泻、开通阻滞、止血、爽身悦志、散气作用。用于各种心脏病、心悸、痔疮出血、久泻等。中医认为,罗勒茎、叶有疏风行气、发汗解表、散瘀止痛、保护内皮细胞损伤、抑制血小板聚集和抗血栓形成、降血脂、抗氧化及抗炎等功效[4]。本研究结果显示,给药4周后, 罗勒高、中、低剂量组和卡托普利组血压均显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);罗勒高、中剂量组和卡托普利组SOD含量明显升高,MDA含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),说明罗勒具有明显的抗氧化作用,与Tohti等[4]的研究结果一致。血管内皮功能不全与高血压谁是因谁是果目前还无定论。就其病理机制而言,能互为因果。一方面血管内皮功能不全所致ET/NO失衡在高血压的发生、发展过程中起重要作用[12],另一方面高血压本身又加重血管内皮功能不全,形成恶性循环。血管内皮是人体最大的内分泌、旁分泌器官,有重要生理功能;在高血压等病理状态下存在血管内皮功能不全, 后者又加速了高血压靶器官的损害。同时本实验首次发现罗勒在降压的同时还具有降低内皮素(ET)的作用,给药4周后ET在罗勒高、中、低剂量组和卡托普利组均显著低于模型组,有统计学差异(P<0.05)。罗勒中剂量组和卡托普利组能降低血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量(P<0.05)。因此芝麻木酚素具有明显的降压和抗氧化作用,其降压机制可能是通过抗氧化作用, 调节内皮细胞的分泌功能,抑制缩血管物质(ET 和AngⅡ)的释放,从而达到降低血压、保护内皮细胞的作用,但其确切降压机制尚需进一步的研究探讨。

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