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乳腺浸润性导管癌PTEN表达与临床病理因素的关系

首席医学网      2009年04月16日 14:21:37 Thursday  
 
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作者:张雨洁, 包永星, 管宇, 覃健    作者单位:新疆医科大学第一附属医院放疗科, 第五附属医院放疗科, 病理科, 新疆乌鲁木齐830011

【摘要】    目的:探讨PTEN基因在人乳腺浸润性导管癌组织中的表达及乳腺浸润性导管癌组织中PTEN表达与各临床病理因素的关系。方法:选取 80例乳腺浸润性导管癌的石蜡标本,采用SP法检测PTEN蛋白的表达程度,分析其与乳腺浸润性导管癌患者年龄、绝经状态、肿瘤位置、肿块大小、组织学分级、临床分期、腋窝淋巴结转移情况的关系。并取非癌乳腺组织石蜡标本进行对照。结果:非癌乳腺组织的PTEN蛋白高表达率明显高于乳腺浸润性导管癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);乳腺浸润性导管癌组织中PTEN蛋白高表达率随腋窝淋巴结转移数目增加而降低,差异有统计学意义(P<0.05);随着组织学分级增高PTEN高表达率依次降低,存在下降趋势;与年龄、绝经状态、肿瘤位置、肿块大小、临床分期无关。结论:乳腺浸润性导管癌中存在着PTEN蛋白表达降低,乳腺浸润性导管癌组织中 PTEN蛋白低表达与腋窝淋巴结转移有关;PTEN蛋白表达有可能成为评估乳腺浸润性导管癌浸润、转移的指标之一。

【关键词】  乳腺浸润性导管癌 抑癌基因 PTEN 临床病理因素

  The relationship between antioncogene PTEN expression and clinicopathologic factors of infitrating ductal breast cancer
 
  ZHANG  Yujie,    BAO  Yongxing,  GUAN  Yu,  et  al

  (Department  of  Radiation  Oncology,  First Affiliated Hospital, Xinjiang  Medical  University, Urumqi  830011,  China)
  Abstract: Objective: To discuss the expression of PTEN on human  infiltrating ductal breast cancer,  to analyze the relationships among the expression  and clinicopathologic factors,  on infitrating ductal breast cancer. Methods:  Tissue samples of infitrating ductal breast cancer were obtained from 80  patients who underwent mastectomy. Using SP immunohistochemistry, we examined the expressive grade of PTEN protein .We analyzed  the relationships among  expressive grade of PTEN protein, infitrating ductal breast cancers in factors of  age, menopausal state and the location, size, tumor histological grade, clinical stage, metastasis of tumors, compared with  noncarcinous tissue of breast. Results:  PTEN expression in noncarcinous tissue of breast  was more than that in infitrating ductal breast cancer, PTEN expression in infitrating ductal breast cancer had negative correlation with  metastasis of axillary nodes,it was statistically significant (P<0.05); and had no correlation  with age, menopausal state,  the location,  size, clinical stage of tumors.  Conclusions:  The expression of PTEN in infitrating ductal breast cancer is decreased significantly and correlates with  metastasis of axillary nodes. The expression of PTEN possibly can act as prognostic index on the infitrating grade and metastasis on human  infitrating ductal breast cancer.

  Key words:  infitrating ductal breast cancer;antioncogene; PTEN; clinicopathologic factors

  乳腺癌发生发展的分子机制仍不完全清楚。肿瘤分子生物学研究证实,肿瘤是一种基因病,是由多种基因变异并长期累积所致。随着人类基因组计划的顺利进行,越来越多的癌基因和抑癌基因被人们发现和认识。PTEN基因编码产物PTEN蛋白是与tensin同源的磷酸酯酶基因(phosphatase and tensin homolog detected on chromsometen,PTEN),是具有磷酸酶活性的抑癌基因。为进一步分析PTEN在乳腺浸润性导管癌中的表达及其与年龄、绝经状况、肿瘤大小、肿瘤位置、临床分期、腋窝淋巴结转移情况、组织学分级的关系,对80例乳腺浸润性导管癌术后石蜡包埋标本进行了深入的研究,我们通过免疫组织化学SP法检测PTEN蛋白在80例乳腺浸润性导管癌中的表达水平。以期探索出临床切实可行的判断乳腺浸润性导管癌预后的指标。

  1资料与方法

  1.1一般资料收集新疆医科大学第五附属医院1994年~2004年外科乳腺癌根治术后石蜡包埋标本80例,所有病例资料完整,均为女性患者,术前未行放化疗等辅助治疗,病理诊断均为原发性浸润性导管癌,详见表1。另外选取非癌乳腺组织(包括癌旁组织、乳腺囊性增生、乳腺纤维腺瘤)石蜡包埋标本30例作为对照。临床分期采用1997年UICC乳腺癌临床分期标准.

  表180例乳腺浸润性导管癌患者一般资料(略)

  1.2免疫组织化学染色石蜡包埋标本4 μm厚连续切片,切片脱蜡后,经高温高压柠檬酸抗原修复2  min,然后按SP法操作,主要步骤如下:滴过氧化酶阻断溶液试剂(A),室温孵育 10  min;滴正常非免疫动物血清试剂(B),室温孵育 10  min,滴加鼠抗人PTEN多克隆抗体,4℃过夜,滴加生物素标记第二抗体试剂(C), 室温孵育 10  min,滴链霉菌抗生物素过氧化酶溶液试剂(D),室温孵育 10  min,各步骤间用0.01 mol/L,pH7.4 PBS缓冲液冲洗(滴加试剂B后除外),DAB液显色,苏木素复染,脱水,透明,封固。PTEN抗体及染色试剂盒购于福州迈新生物技术公司。

  1.3PTEN染色特征及结果评判取厂家福州迈新生物技术公司提供的已知含有待检抗原PTEN的切片作阳性对照。PBS替代第一抗体作阴性对照。PTEN阳性着色分布于细胞核,呈深黄染色,随机选择10个高倍视野,计数1000个肿瘤细胞,计算阳性细胞百分率, <5%为阴性, ≥5%、<25%为“+”,≥25%、<50%为“++”,≥50%、<75% 为“+++”,≥75%为“++++” 。在分析时将“-” 、“+” 、“++”归为低表达,将“+++”、“++++”归为高表达。

  1.4组织学分级本实验组所有免疫组织化学染色切片均有对应HE染色切片,按下列标准对乳腺浸润性导管癌病例HE染色切片进行评分:(1)腺管形:明显为1分,中等为2分,无为3分;(2)核异型:少见为1分,中等为2分,明显3分;(3)每高倍视野下核分裂像:<1个为1分,1~5个为2分,>5个为3分。以上3项得分相加,积分3~5分者为组织学分级1级,6~7分者为2级,8~9分者为3级。

  1.5统计学处理建立数据库,采用SPSS13.0统计软件包对非癌乳腺组织和乳腺浸润性导管癌组织PTEN表达程度进行Wilcoxon秩和检验,其余部分行χ2检验。检验水准α=0.05。

  2结果

  2.1非癌乳腺组织的PTEN表达和乳腺浸润性导管癌组织的PTEN表达本组资料显示30例非癌乳腺组织中PTEN蛋白表达(-)2例占6.7%,(+)4例占13.3%,(++)1例占3.3%,(+++)17例占56.7%,(++++)6例占20%;80例乳腺浸润性导管癌组织中PTEN蛋白表达(-)27例占33.8%(图1),(+)5例占6.3%,(++)16例占20%,(+++)14例占17.5%,(++++)18例占22.5%(图2)。经Wilcoxon秩和检验非癌乳腺组织和乳腺浸润性导管癌组织有统计学差异(P=0.016),通过观察平均秩次发现,非癌乳腺组织在PTEN蛋白表达在阳性程度上要大于乳腺浸润性导管癌组(表2)。30例非癌乳腺组织中有23例PTEN蛋白高表达占76.7%,低表达7例占23.3%。而80例乳腺浸润性导管癌癌组织中PTEN蛋白高表达有32例占40.0%,低表达有48例占60.0%。

  图1乳腺浸润性导管癌PTEN染色(阴性) (10×10)(略)

  图2乳腺浸润性导管癌PTEN染色 (10×10),PTEN阳性着色分布于细胞核,呈深黄染色,阳性表达细胞>75%(略)

  表2非癌乳腺组织的PTEN表达和乳腺浸润性导管癌组织的PTEN表达(略)

  2.2PTEN蛋白表达与临床病理因素的关系  乳腺浸润性导管癌组织中PTEN蛋白高表达率随腋窝淋巴结转移数目增加而降低,有统计学意义(P<0.05);随着组织学分级增高PTEN高表达率依次降低,存在下降趋势;与年龄、绝经状态、肿瘤位置、肿块大小、临床分期无关,见表3。

  表3PTEN蛋白表达和临床病理因素的关系(略)

  3讨论

  长期以来,临床工作中多以肿瘤大小、腋淋巴结转移情况、激素受体水平来评估乳腺癌病人的预后,但结果远不尽人意。近十年来,随着肿瘤分子生物学深入的研究,已发现一些与乳腺癌发生发展密切相关的基因。随着分子生物学和分子遗传学的发展,发现多种癌基因同乳腺癌的发生和发展有关,抑癌基因的失活和癌基因的激活与乳腺癌的发生和发展是分不开的。抑癌基因PTEN包括N端、C2区域和C端区域。其主要结构功能区位于N端,编码的蛋白与张力蛋白、辅助蛋白同源,参与细胞生长及肿瘤细胞浸润、血管发生及肿瘤转移的调节;并具有磷酸酶活性,参与细胞调控。PTEN的C端可调节PTEN稳定性和酶活性。其C2区域参与正确定位PTEN的催化结构域[1]。PTEN通过PI3K/PKB/AKT信号转导途径而发挥抑癌作用[2]。PTEN抑制PI3K活性,使PIP2向PIP3转化逆转,从而阻断AKT的作用,对细胞增殖起负调节作用[3]。PTEN丢失,细胞失去这种调节作用,无疑会促进肿瘤的进行性生长,与人类恶性肿瘤的发生普遍相关[4]。本研究分析了80例乳腺浸润性导管癌患者及30例非癌乳腺组织患者PTEN蛋白的表达情况。说明乳腺浸润性导管癌的发生发展中存在PTEN蛋白表达降低。比袁火忠(49.3%)和Depowski(48.0%)的低表达率略高[5, 6]但结论一致,可能与本组病例均是浸润性导管癌,而浸润性导管癌又是乳腺癌中恶性度较高的一种有关。本研究显示PTEN低表达患者的百分比随着淋巴结转移数目的增加而增加(P<0.05)。说明PTEN低表达与腋淋巴结转移相关,与Tsutsui等[7]和万榕等[8]的研究一致。其作用机制可能是与细胞骨架蛋白Tensin同源的PTEN,在细胞迁移和肿瘤侵袭转移的两条通路上扮演着重要角色,一方面PTEN通过抑制局灶粘附激酶(FAK)的磷酸化,使FAK/P130case通路受阻,阻断整合素介导的细胞迁移和局灶黏附的形成,从而抑制细胞的方向性迁移;另一方面PTEN通过使Shc去磷酸化,阻断Shc/MAKP通路,抑制细胞的无方向性随即迁移[9]。PTEN基因异常引起其磷酸酶活性急剧下降,促进肿瘤细胞的侵袭和转移。本组资料显示,80例乳腺浸润性导管癌中组织学分级与PTEN蛋白表达率无统计学差异(P>0.05),而易风涛等[10]研究认为PTEN低表达与肿瘤细胞学分级差异有统计学意义,与本研究结果不一致,可能与实验样本数量小有关。本组资料显示PTEN表达与年龄、绝经状态、肿瘤位置、肿块大小、临床分期、无关。通过分析我们认为,乳腺浸润性导管癌组织中存在着PTEN蛋白表达降低;PTEN蛋白表达水平与乳腺浸润性导管癌淋巴结转移有关;PTEN蛋白的高表达程度有可能作为评估乳腺浸润性导管癌浸润转移的一个指标。

【参考文献】
    [1]Li X, Lin G, Wu B, et al. Overexpression of PTEN induces cell growth arrest and apoptosis in human breast cancer ZR751 cells[J]. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai), 2007,39:74550.

  [2]Hlobilkova A, Knillova J, Svachova M, et al. Tumour suppressor PTEN regulates cell cycle and protein kinase B/Akt pathway in breast cancer cells[J]. Anticancer Res, 2006,26:10151022.

  [3]Lu Y, Lin YZ, LaPushin R, et al. The PTEN/MMAC1/TEP tumor suppressor gene decreases cell growth and induces apoptosis and anoikis in breast cancer cells[J]. Oncogene, 1999,18:70347045.

  [4]Kerr RA. A surprising function for the PTEN tumor suppressor[J]. Science, 1998,282:10271030.

  [5]袁火忠. 抑癌基PTEN在乳腺癌组织中的表达[J]. 实用癌症杂志,2002,17(1): 3739.

  [6]Depowski PL, Rosenthal SI, Ross JS. Loss of expression of the PTEN gene protein product is associated with poor outcome in breast cancer[J]. Mod Pathol, 2001,14:672676.

  [7]Tsutsui S,Inoue H,Yasuda K. Reduced expression of PTEN protein and its prognostic implications in invasive ductal carcinoma of the breast[J]. Oncology, 2005,68:398404.

  [8]万榕, 施东捷 ,王海燕,等. 乳腺癌组织抑癌基因PTEN的表达及其意义[J]. 中国组织化学与细胞化学杂志, 2005,14:453456.

  [9]彭惠,杨光华. 肿瘤抑癌基因PTEN/MMACI/TEPI在肿瘤研究中的进展[J]. 临床与实验病理学杂志,2001,17(4):342344.

  [10]易峰涛,胡国清,李德忠,等. PTEN及bcl2和p53蛋白表达与乳腺癌预后的关系[J]. 肿瘤防治杂志, 2004,11:11471150.

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