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幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌BIB发酵及纯化工艺研究

首席医学网      2014年12月04日 13:33:21 Thursday  
 
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作者:潘兴; 王保宁; 杨靖; 李健春; 祝捷; 周永君; 王红仁; 李明远; 李婉宜

【摘要】  目的 初步建立重组幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌(BIB)的高密度发酵及其蛋白纯化工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,放大工艺至50L发酵罐中,对影响目的蛋白收率的因素如发酵培养基、工作种子接种量、诱导剂浓度、诱导起始时间、诱导持续时间及诱导剂添加方式等进行优化验证;并利用rBIB蛋白高等电点特性(pI=9.05),在pH 7.0~7.5的磷酸盐缓冲液中目的蛋白带正电荷,采用阳离子交换层析进行纯化,对阳离子交换层析填料及纯化缓冲液的pH进行优化。结果 经高密度发酵后BIB菌体产量为70g/L,蛋白表达量为32%;rBIB蛋白经阳离子交换层析纯化后其纯度为91.8%。结论 该工艺的初步建立为深入研究rBIB蛋白性质及其规模化生产奠定了基础。

【关键词】  幽门螺杆菌; 疫苗; 高密度发酵; 阳离子交换层析; 尿素酶B亚单位

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